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液氮罐凍存樣品的方法與注意事項
液氮罐凍存樣品的方法 ：(以獨立樣品pc12為例)
1、選擇處于對數(shù)生長期的細胞。一般長約為70%-80%即可凍存，細胞數(shù)目過少或過多都不宜凍存，因為復(fù)蘇后細胞生存率會降低;收集細胞24小時前換液一次。
2、用培養(yǎng)液直接將細胞消化下來，離心，1000轉(zhuǎn)， 5min;
3、吸去上清，在離心管中加入凍存液，(凍存液配制按照60%已過濾的培養(yǎng)基 + 10%DMSO+ 10%胎牛血清+20%馬血清配置凍存液(其中DMSO要自己配置)， 4度保存?zhèn)溆谩?，加入凍存液后吹散計數(shù)，控制細胞懸液密度為5*106或1*107左右(不過有人建議其實不必要細胞計數(shù)，根據(jù)細胞的多少，估計一下一瓶細胞凍存幾支就行了，細胞密度高一點比較好，操作時間短，對細胞損傷小。)， 細胞懸液以1ml的量分裝入凍存管中(每個凍存管添加不超過1-1.5m)，在凍存管上標記凍存日期，姓名以及細胞種類。最好選擇進口的凍存管;
4、要嚴密封口，慢凍過程(1.先將凍存管放入4℃冰箱，約1H。 2.接著置于-20℃冰箱，約40min-1h。 3.置于-80超低溫冰箱中放置過夜。 4.置于液氮罐中長期保存。) ， 注意將凍存管豎立于合適大小的不銹鋼飯盒中，應(yīng)避免凍存管倒立。
液氮罐凍存樣品的注意事項：
1、使用DMSO前，不需要進行高壓滅菌，它本身就有滅菌的作用。高壓滅菌反而會破華它的分子結(jié)構(gòu)，以至于降低冷凍保護效果。在常溫下，DMSO對人體有害，故在配制時最好戴上手套操作。最好使用前將DMSO4度凍一下，對細胞的毒性會減少。
2、不宜將凍存細胞放置在0℃～-60℃這一溫度范圍內(nèi)過久，低溫損傷主要發(fā)生在這一溫度區(qū)內(nèi)，是“危險溫區(qū)”。
3、注意定期檢查液氮罐內(nèi)液氮量，及時添加。
4、多余的凍存液可以4度保存?zhèn)溆谩?/p>
